培養(yǎng)基污染快速檢測(cè)新方法

       細(xì)胞治療產(chǎn)品（CTP）和組織工程等前沿生物**領(lǐng)域?qū)o(wú)菌環(huán)境要求極高。傳統(tǒng)無(wú)菌檢測(cè)依賴微生物培養(yǎng)，通常需7–14天[，而快速微生物檢測(cè)方法（RMMs）也需約7天[，難以滿足及時(shí)放行的需求。支原體污染尤其棘手，因其難以察覺(jué)且可長(zhǎng)期潛伏[。因此，開發(fā)更快速、靈敏、非侵入性的檢測(cè)手段成為行業(yè)迫切需求。

一、酶底物法

?原理?：用MMO-MUG培養(yǎng)基同時(shí)檢測(cè)大腸菌群和大腸埃希氏菌，通過(guò)顏色變化判斷污染。

?操作?：水樣加培養(yǎng)基搖勻，36℃培養(yǎng)24小時(shí)，變黃即有大腸菌群。

?適用?：水、食品、土壤等污染評(píng)估。

二、PCR檢測(cè)法

?原理?：針對(duì)支原體16S rRNA基因設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增后電泳觀察。

?操作?：棉簽擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁，提取DNA做PCR，無(wú)條帶則無(wú)污染。

?優(yōu)勢(shì)?：靈敏度高、結(jié)果快。

三、DNA熒光染色法

?原理?：用熒光染料（如Hoechst）標(biāo)記DNA，顯微鏡下觀察。

?操作?：共培養(yǎng)細(xì)胞和Vero細(xì)胞，染色后看熒光斑點(diǎn)。

?特點(diǎn)?：直觀快速。

四、高內(nèi)涵篩選法

?原理?：結(jié)合熒光成像和自動(dòng)化分析，檢測(cè)核外DNA。

?操作?：細(xì)胞接種后染色，用系統(tǒng)分析圖像。

?優(yōu)勢(shì)?：準(zhǔn)確度高。

五、支原體快速檢測(cè)試紙法

?原理?：試紙抗體與支原體抗原結(jié)合變色。

?操作?：棉簽取樣，浸入提取液后觀察。

?特點(diǎn)?：操作簡(jiǎn)單、結(jié)果快。

六、顯色培養(yǎng)基檢測(cè)法

?原理?：通過(guò)菌落顏色鑒定微生物。

?操作?：用顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)，根據(jù)顏色判斷。

?適用?：食源性致病菌檢測(cè)。

七、放射測(cè)量法

?原理?：用放射性同位素標(biāo)記底物，檢測(cè)代謝產(chǎn)物。

?操作?：培養(yǎng)基加放射性底物，測(cè)CO?釋放。

?適用?：菌血癥快速診斷。

八、NPS/NBB-A培養(yǎng)基檢測(cè)法

?原理?：NPS檢測(cè)啤酒中乳酸菌，NBB-A檢測(cè)嚴(yán)重污染。

?操作?：樣品加培養(yǎng)基培養(yǎng)，觀察結(jié)果。

?特點(diǎn)?：啤酒酵母抑制劑避免干擾。

九、多管發(fā)酵法

?原理?：EC培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)氣，伊紅美藍(lán)平板確認(rèn)。

?操作?：水樣接種EC培養(yǎng)基，產(chǎn)氣后轉(zhuǎn)種平板。

?適用?：耐熱大腸菌群測(cè)定。

十、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)法

?原理?：菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)。

?操作?：水樣與培養(yǎng)基混勻，36℃培養(yǎng)48小時(shí)。

?適用?：水質(zhì)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)。

?小結(jié)?：PCR、熒光染色和試紙法適合快速篩查，顯色培養(yǎng)基和多管發(fā)酵法更精準(zhǔn)，選方法時(shí)看你的具體需求和場(chǎng)景。